Ул. "Коршунова" G. "Трансгенезис в пъдпъдъци"

Извадки от резюмето на автора за докторска степен по биологични науки, Москва, 2012 г.


1. Общи характеристики на работата
2. Материал и методи на изследване
3. Резултати от изследванията
данни
Информация за практическото използване на резултатите от научните изследвания
Препоръки за използване на научни заключения
Списък на произведения, публикувани по темата на дисертацията

3. Резултати от изследванията

Получаване и фенотип на трансгенни пъдпъдъци от говежди ген за растежен хормон

Пъдпъдъци, Трансгенни ген говежди растежен хормон, микроинжектиране bylipolucheny хирургически ekzogennoyDNK пъдпъдъчи яйца зрели като така inahodivshihsya в късните етапи на узряване (krupnyefollikuly). За инжектиране, използвайки ген konstruktsiyupMTbGH (2 х ATT), съдържащ естествен ген rostabyka хормон (ГРХ ген), която е под kontrolemmetallotioninovogo промотор (MT бала) (Фиг. 1) .Posledny активиран цинкови йони и други tyazhelyhmetallov съдържа в тялото на птицата. Активният промотор предизвиква изразяването на ген на говежди растежен хормон. В трансгенни от тази конструкция на пъдпъдъци има синтез на този хормон.

Фигура 1 Физична карта plazmidypMTbGH (2 х ATT) (посочено рестрикционни ендонуклеазни сайтове) се използва като генен конструкт генетично модифицирани пъдпъдъчи pripoluchenii

93, в които са инжектирани 2,80 яйца, овулатирани и разположени в големи фоликули. Те получиха 122 пъдпъдъри от тях.

Блот хибридизация техники и PCR анализ byloissledovano 180 ДНК проби, изолирани от ембриони, органи и тъкани на експериментални растеж хормон perepelov.Nukleotidnye генни последователности, намерени в ДНК bykabyli 10 ембриони и 14 osobeyperepelov. Разпределението на трансгена в тъканите на експерименталния пъдпъдък е илюстрирано на Фиг. 2.

Трансгенни пъдпъдъци бяха изследвани за съдържанието на говежди соматотропин. В някои проби кръвта се открива в количество от 1.0-3.0 ng / ml. Така заболяване, трансгенна експресия в пъдпъдък кръвния poluchennyhtransgennyh варира от 1.0 до 3.0 нг / mlbychego соматотропин, като кръвна група perepelovkontrolnoy желания протеин otsutstvoval.Transgennost пъдпъдък проявява в редица поколения.

Фигура 2. Southern блот gibridizatsionnyyanaliz ДНК от различни тъкани пъдпъдък: 1 - птица 116, ангина myshtsa- 2 - птица 116 pechen- 3 - птица 116, крака myshtsa- 4 - птица 22 miokard- 5-22 домашни птици, ангина myshtsa- 6 - птица 107, ангина myshtsa- 7 - ptitsa107, miokard- 8 - кръв контрол пъдпъдък plyusplazmida при 1-2 копия на хаплоиден геном

През poluchennyhperepelov за култивиране експеримент и прибиране на потомството се наблюдава chtonekotorye женски разрушени големи яйца (14,0-21,0 ж) и с обичайните масови izyaits излюпени perepelyata zhivoymassoy с 15-25% над нормалното. Аутопсията показа, че яйцето не е двулицев и е покрито с нормално пигментирана твърда черупка. Беше ustanovlenasvyaz "krupnoyaichnosti" функция с трансгенни животни, както и наследяване на тази черта (фиг. 3).

Фигура 3. Пример за фенотипна проява на трансгенност при потомството на пъдпъдъци

Това служи като основа за размножаването на експерименталните индивиди и изследването на фенотипа на получената лисица. Трансгенни индивиди са били използвани за получаване на потомство за образуване и по-нататъшно изследване на експерименталната група от пъдпъдъци. Понастоящем са получени и проучени 33 поколения експериментални пъдпъдъци.

При трансгенните пъдпъдъци живото тегло е с 5-15% по-високо, отколкото при контролата. Техният потомък запазва превъзходство в живата маса (Фигура 4), а разликите при жените са по-значими. При дневна и 1-седмична старост експерименталните птици са по-големи от контролните птици съответно с 21 и 13%. Средна sutochnyhperepelyat тегло в експерименталната група е 9.1, в 7.4 kontrolnoy- В 7- и се наблюдават 20-седмични statisticheskidostovernye разлики само при жени са съответно 8,0 и 6,0% (р<0.001).

Масата на ежедневните млади птици се дължи до голяма степен на масата на яйцата за люпене. В нашите експерименти масата на трансгенните ежедневни пъдпъдъци е пропорционално увеличена (r = +0.810). Prietom всички perepelyata се движеха активно reagirovalina звук, избраха меките корема, чиста kloaku.Puh мека, гладка, лъскава, pravilnopigmentirovanny (кафяв с две svetlymipoloskami на гърба). Краката и клюнът са силни, блестящи. Възрастните не се различават външно от контрола върху пъдпъдъка.

Фигура 4. Живо тегло на пъдпъдък и контролна група, средно 15 поколения

Живо тегло трансгенни пъдпъдъци otpokoleniya варират в поколение обаче тенденция линия за etogopokazatelya 20 седмична възраст показват obotsutstvii тенденция към намаляване (лек наклон, R2 = 0019) (Фиг. 5).

Фигура 5. Живо тегло на самоконфлуентите на възраст 20 седмици, трансгенни в гена на говежди соматотропин, в различни поколения.

Хормоналният статус на трансгенните пъдпъдъци по изследваните показатели не е подложен на значителни промени в сравнение с контролните. Средната стойност на нивото на инсулин при жените от експерименталната група е 15,8, а тази на Usamites е 16,4, в сравнение с 10,7 и съответно 16,5 микроU / ml от контролната група. Индивидуалните стойности на този индикатор варират в експерименталната група от 6.7 до 30.9 yu от контролната група, от 7.8 до 18.1 microU / ml.

В стойностите на индексите на съдържанието на тиреоидни хормони, пъдпъдъците на пъдпъдъците на експерименталните и контролните групи показаха голямо разпространение. По този начин, минималните концентрации на тироксин са 12 nM, максимумът е 10-12 nM. Srednieznacheniya направени от опитни жени и мъже 4.2 6,1nM, докато контрол съответно 4.7 и 5.7 nM.Kontsentratsiya трийодтиронин имали женски usamtsov е 0.7 и 1.6 пМ, съответно, в контрола 0 8 и 1.6 nm. Значителни промени в концентрацията triyodtiro ninabyli по-често при жени на - от 0.2 до 2.1 пМ, и в двата мъжки tovremya - от 1.2 до 2.1 пМ.

Съотношението на ktriyodtironinu концентрация инсулин чрез който да се съди sdvigemetabolizma в тялото е по-висока при жените, отколкото при мъже и жени на експерименталната група в сравнение skontrolnoy, потвърждавайки по-висока urovenanabolizma експерименталните жените, изразено като яйца povyshennomsinteze компоненти.

Данните, получени от увеличението на титри на антитела в кръвта яйцата izheltke в отговор на антиген повишаване на имунните пъдпъдъци състояние svidetelstvuyuto opytnoygruppy изразена в ускорено производство на антитела kvvodimomu антиген. След четири седмици титрите на антителата от експерименталните пъдпъдъци са по-високи (стр<0.001), отколкото в контролата (Таблица 1). Значителни разлики също са получени за екстракти от яйчен жълтък от контролните и експерименталните групи, разрушени 4 седмици след ваксинацията (p<0.001).

При трансгенните пъдпъдъци и техните потомци теглото на яйцата е с 10-20% по-високо от контролата (стр<0.001). При пиковото производство теглото на яйцата при експерименталните пъдпъдъци е средно 13,0 за 33 поколения. Разпространението на индикатора към отделните проби е от 11,3 до 15,0 g.

Пъдпъдъци производството на яйца в експерименталната група в pokoleniyahkolebalas от 200 до 235 яйца в контрола - от 193 до 227yaits за период производството на 10 месеца. Средният за този период в експерименталната група е бил 2749,4 g, което е с 11% повече в сравнение с контролната група (p<Средният брой яйца и тяхната маса по поколения са показани на диаграмата (Фигура 6).

Фигура 6. Броят (1, 2) и теглото (3.4) на яйцата средно за 19-33 поколения, 1, 3 - трансгенни, 2, 4 -

В експерименталните и контролните групи увеличаване на яйце маса се дължи do14,0 г пропорционална uvelicheniemmassy нейните съставни части - черупката, протеин zheltka.Pri дял жълтък е 29-33%, протеин - 58-61%, черупки - 9-10%. Тъй като теглото на яйцата по-горе съотношение 14 гр vopytnoy група елементи izmenilos.Dolya жълтък се увеличи до 39.6%, протеин - намалява do52,3% и черупката - до 8.1%. Индексът на формата на яйца с тегло от 8.0 до 14.0 g в контролните и експерименталните групи варира в рамките на 75.483.6%. При по-нататъшно увеличаване на теглото експерименталната група е получила намаляване на индекса на формата до 67.5%, т.е. формата е станала по-удължена.

Повечето от сухите витамини на пъдпъдъчи яйца се консумират от липиди. В яйчния жълтък на експерименталната група те съдържат от 26.1 до 29.3%, контролната група -27.8-29.2%.

Съдържанието на протеини е било 15,1 до 17,0% за всички анализирани жълтъци, независимо от тяхното тегло и аксесоар към групата. Не е установена и в двете групи редовни разлики, и в съдържанието на вода в жълтъците, носещи яйца маса.

Протеинът от пъдпъдъчени яйца съдържа 85,0-87,9% вода. Процентът протеини е от 8.9 до 10.9%. Също така нямаше правни различия между групите.

Съдържанието на каротеноиди в яйчен жълтък тестова група byloot 9.2 до 16.6 г / г в контрола - от 12.2 до 20,7mkg / г. Имаше тенденция към увеличаване на съдържанието на каротеноиди с увеличаване на теглото на яйцата. А Soderzhanievitamina в яйчен жълтък тест група променя от 12,8do 16.8 гр / гр в контрола - от 14,2 до 19,7 мкг / g.Soderzhanie витамин Е в жълтъка на яйцата в експерименталната gruppyvarirovalo 56,7-80, 5 ug / g, в контролата - от 75.4 до 90.5 ug / g. Витамин В2 в жълтъка на яйцата opytnoygruppy съдържа 3,68-4,10 мг / г, контролният -3,82-4,42 мкг / г и не зависи от масата на яйцето. Витамин В2 в яйчната група на експерименталната група е в диапазона 1.681.91 μg / g, контрола - 1.95-2.16 μg / g. Аминокиселинният състав на яйчния протеин на трансгенни пъдпъдъци не се различава от този на контролните животни.

На жълтъци на яйца от пъдпъдъци за контрол на част nasyschennyhzhirnyh киселини представляват 41.35, -41.06 мононенаситени, полиненаситени - 17,59%. Количеството на наситен ipolin enasyschen-TION на мастни киселини в яйчен жълтък липиди в ptitsv експериментална група е малко по-голям и sostavlyalasootvetstvenno 42,08 и 19,41%, количеството mononenasyschennyhzhirnyh киселини е по-малко от контрол - 38,51% .Vyyavlennye разлики се дължат главно uvelicheniemsoderzhaniya стеаринова киселина и линолова киселина 1,8% олеинова киселина iumensheniem количество от 2.3% в пъдпъдъчи яйца на тестовата група. Когато тази маса dolyaoleinovoy киселина варира от 31.40 до 37.00%, линолова - от 19.90 до 17.30%. В експерименталната gruppesoderzhanie стеаринова киселина в яйца от кокошки 3- U6 месечна възраст са съответно 17,03 и 16,76% линолова киселина - 18,08 и 19,33%. Съотношение oleinovoykisloty в яйца от кокошки okazalas38,55 експериментална група и 33,59%, съответно. Следователно priizmenenii теглото на яйцата и в експерименталните и контролните gruppahperepelok наблюдават колебания в съдържанието otdelnyhzhirnyh киселини в яйчен жълтък липиди. Etootnosilos главно на мастни киселини с 18 въглеродни атома: стеаринова, олеинова, линолова и линоленова.

Така, в нашето изследване eksperimentalnopokazano че произвежда трансгенни ген gormonarosta пъдпъдък бик беше усилване biosinteticheskihprotsessov в организма непроменен в biologicheskihzakonomernostyah определяне на процесите на растеж и razvitiyaptitsy, образуване на яйце. Dannyesvidetelstvuyut получи за възможно практическо ispolzovaniimetodov трансгенеза в гнездящите птици в povyshenieproduktivnyh показатели.