Методически подходи за определяне на видовата специфичност на месните продукти

Идентифицирането на животинска ДНК е необходимо за откриване на фалшифициране на месни продукти. Разработването на методи за контрол на безопасността и качеството на месните продукти включва обединяване и тестване на методи, които позволяват да се идентифицира неговата видова специфичност.

Като бърз и надежден метод за определяне на видовете месо produktsiipredlozhena PCR позволява да се получат възпроизводими резултати stepenitochnosti високи. Принципът на метода се повтаря увеличение kontsentratsiispetsifichnogo за този тип ДНК област на животните се използва праймерен чифт spetsialnopodobrannoy. Матрицата, използвана за митохондриална реакционната fragmentygenov или ядрената ДНК, които обикновено са strogospetsifichnymi за всеки животински вид: 12S рРНК, D-линия, 16S рРНК tsitohromB, тРНК Val. В сравнение с други методи за анализ на базата, например, за идентифициране на протеини е suschestvennoepreimuschestvo PCR: ДНК молекула е достатъчно стабилна и е pozvolyaetprovodit надеждно откриване дори в продуктите се подлагат обработка suschestvennoytermicheskoy.

PCR при използване на специфични за видовете праймерна двойка пъдпъдък Намибия определя наличието или отсъствието на пъдпъдъчи яйца в 12 проби mayonezov.Predvaritelno праймерна двойка се изпитва за взаимодействие с възможност vozniknoveniyaperekrestnoy пет различни ДНК стандарти от животински произход: пиле, пъдпъдък, патица, пуйка, говеждо месо. Праймерите върху пъдпъдъка показват надеждна видова специфичност.

За да се идентифицират се използва метода на вместен PCR реакция, която позволява povysitchuvstvitelnost и да се избегне нежелано страна produktov.Metod основава на последователното използване на две двойки праймери - външен ivnutrenney. След първия кръг на продукт усилване yavlyaetsyadostatochno голям фрагмент на рРНК гениите 12S, е 720 базови двойки присъства в митохондриалния генома на следните птици: пъдпъдък, фазан, яребица, токачки, яребица, Уудкок, гривяк, Мейвис, пиле, пуйка, гъска, мускус патица.

За следващия етап на идентификация се използва втора праймер-специфична двойка праймери, която е допълваща към вътрешния фрагмент на ампликона, получен след първия кръг на PCR. Резултатът от вземането на пробите е нуклеотидната последователност в 129 двойки азотни бази, записани чрез метода на хоризонтална електрофореза.

Освен това, като вътрешна контрола се използва parapraymerov друг, допълващ се свързват с фрагмент на гена, кодиращ за 18S гРНК, 89 базови двойки в дължина. Този ген е обща за бозайници и ptits.Takim начин, във втория кръг на PCR се провежда dyupleksnuyu: vreaktsionnuyu смес се инжектира едновременно праймери вътрешен контрол и видове специфични dlyaperepela. Едновременното присъствие на ултравиолетова светлина ленти блясък на ниво 2 129 и 89 базови двойки може надеждно да се твърди, че има vsostave майонеза пъдпъдъчи яйца.

Освен класическия за PCR за определяне на специфичния метод spetsifichnostiispolzuetsya «SureFood® Animal-ID», представляващи kompleksPCR-ELISE и имуноензимни откриване. Търговски комплекти с pomoschyuvidospetsifichnyh проби за определяне на наличието в проба на ДНК sleduyuschihzhivotnyh: крави, кози, свине, овце, елени, пиле, гъски, пуйки и utki.Metodom «SureFood® животните-ID» изследвания бяха проведени 17 myasnoyproduktsii проби, съдържащи в състава си свинско, пилешко, агнешко, пуешко, телешко, патешко, 9 от които е на многокомпонентни продукти: пушени и варени колбаси, месо, колбаси и brynza.Rezultaty разкри висока чувствителност на метода (граница на откриване на sostavilne по-малко от 1%) и висока специфичност на проби, което позволява идентифициране на ДНК vozmozhnostdostovernoy няколко животински видове в mnogokomponentnyhobraztsah, покрай дълбоко термична обработка.

В бъдеще в рамките на тази работа се планира разработването, обединяването и тестването на методите за контрол на месните продукти въз основа на специфичната за вида ДНК от животински произход.

Ustinova Yu.V., Peschanitskaya EV
Държавен университет по хранително производство в Москва